Kết quả thực hiện: |
Thành phần Mix PCR: 2,5 µl h-Taq buffer 10X, 0,5 µl dNTP 10mM, 2 µl MgCl2 25mM, 0,5 µl Primer AP3-F/R 25µM, 0,25 µl Primer IC (WSSV-IC-143F/145R) 10µM, 0,4 µl h-Taq enzyme, 13,85 µl nuclease free water. Bổ sung 5µl dịch DNA mẫu và thực hiện chương trình 950C trong 15 phút; 40 chu kỳ 950C trong 20 giây; 530C trong 30 giây; 720C trong 30 giây; 720C trong 5 phút.
Độ biến thiên nội phản ứng của quy trình PCR EMS/AHPND có %CV là 2,689% và độ biến thiên liên phản ứng là 9,05%. Độ đặc hiệu chẩn đoán và độ nhạy chẩn đoán đều là 100% trên các mẫu khảo sát dương tính và âm tính. Quy trình PCR phát hiện EMS/ HPND có độ ổn định khi thực hiện với 3 dòng máy PCR khác nhau. Các thành phần phản ứng PCR c độ ổn định sau 6 tháng bảo quản ở nhiệt độ -200C |